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高中第二册第六章遗传和变异 实验十一DNA的粗提取与鉴定
作者:本站  来源:本站原创  发布时间:2007-10-10 8:41:36  发布人:baycen

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第六章 遗传和变异 实验十一DNA的粗提取与鉴定
目的要求
  1.了解实验原理。
  2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法,观察提取出来的DNA物质。
  3.通过本实验培养实验操作能力和观察能力。
  实验原理
  1. DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
  2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
  3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
  注意事项
  1.步骤3析出含DNA的黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。
  2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌,但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
  实验用具
  鸡血细胞液(5~10mL);体积分数为95%的冷酒精,蒸馏水,质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液,物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液,二苯胺试剂;烧杯(100mL,1个, 50mL, 500mL,各2个),漏斗,试管(20mL,2个),玻璃棒,滴管,量筒(100mL,1个),纱布,镊子,滤纸,铁架台,铁环,三角架,酒精灯,石棉网,载玻片,试管夹。
   课时安排 一课时
    课前准备
  制备鸡血细胞液,方法是:将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL,置于500mL烧怀中,注入新鲜的鸡血(约180mL),用玻璃棒搅拌,使其充分混合,以免凝血。静置于冰箱内一天,使血细胞自行沉淀。(也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。用吸管吸去上清液。
    板书:(课前写好)
实验十一 DNA的粗提取与鉴定
  实验原理:
    1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
    2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
    3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
  方法步骤
  1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。 5 min
  2.溶解DNA:
  3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢
  4.过滤:取黏稠物
  5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3 min
  6.过滤:取滤液。
  7.提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢。5 min
  8.DNA的鉴定:沸水浴5min
 
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